荧光标记

       荧光染料是生物分子标记的重要工具。荧光素衍生物可被广泛地标记在那些用于荧光显微镜、流式细胞仪和免疫荧光检测等领域的试剂上。通常,生物素、FITC等染料可任意标记在多肽N端或C端。但我们推荐N端标记,其成功率更高、所需时间更短、更易操作。由于多肽都是从C端往N端合成,所以N端修饰将是固相合成的最后一步,不再需要额外的偶联步骤。相反,如果是C端标记,则需要附加步骤,而过程会更复杂。

     

普通荧光修饰

荧光修饰中文名称 N端 N端带有linker
生物素标记多肽 Biotin- Biotin-Ahx-
异硫氰酸荧光素 FITC- FITC-Ahx-  
5-羧基荧光素 5-FAM- 5-FAM-Ahx-
丹磺酰荧光素 Dansyl- Dansyl-Ahx-
5-羧基四甲基罗丹明 TMR-  (TAMRA-) TMR-Ahx-  (TAMRA-Ahx-)

 
通过Lys侧链氨基连接的荧光修饰

多肽N端 多肽序列中间 多肽C端
Lys(Biotin)-  -Lys(Biotin)-  -Lys(Biotin)
Lys(FITC)-  -Lys(FITC)-  -Lys(FITC)
Lys(5-FAM)-  -Lys(5-FAM)-  -Lys(5-FAM)
Lys(Dansyl)-  -Lys(Dansyl)-  -Lys(Dansyl)
Lys(TMR)-  -Lys(TMR)-  -Lys(TMR)
Lys(Dnp)-  -Lys(Dnp)-  -Lys(Dnp)

 
我司常做的荧光物质的激发光波长和发射光波长

荧光基团 Ex(nm) Em(nm) 荧光基团 Ex(nm) Em(nm)
羟基香豆素 325 386 R-phycoerythrin (PE) (489) 565 578
丹磺酰氯 340 578 Rhodamine Red-X 560 580
AMC 345 445 Tamara 565 580
甲氧基香豆素 360 410 Alexa fluor 555 556 573
Alexa fluor 系列 345 442 Alexa fluor 546 556 573
氨基香豆素 350 445 Rox 575 602
Dabcyl 453 - Alexa fluor 568 578 603
Cy2 490 510 Texas Red 589 615
FAM 495 517 Alexa fluor 594 590 617
Alexa fluor 488 494 517 Alexa fluor 621 639
FITC 495 519 Alexa fluor 633 650 668
Alexa fluor 430 430 545 Cy5 (625) 650 670
5-FAM 492 518 Alexa fluor 660 663 690
Alexa fluor 532 530 555 Cy5.5 675 694
HEX 535 556 TruRed 490; 675 695
5-TAMRA 542 568 Alexa fluor 680 679 702
Cy3 550 570 Cy7 743 767
TRITC 547 572 Cy3.5 581 596

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